荧光定量PCR 如何做到定量呢?

2016-11-28技术资料

来源:转载网络 作者: dzwd

我要做RT-qPCR,第一步是提取植物内的总RNA,这里出现个问题,参考步骤里边写的是取0.1g叶片,这个0.1怎么取啊?:rol:研磨的时候选用的是液氮,研钵上粘的满哪都是:shuai:,我纠结了,有做过的吗?你们用的什么方法啊!望不吝赐教!!

这个量没必要那么精确啦,差不多就行了,反正还要有内参的
 
原来如此!
 

做反转录的时候,不同的样品使用同样量的RNA就可以啦。然后做PCR时使用同样量的cDNA做模板,最后,还有内参来矫正模板量差异。


我是这么理解的,你看对不对哈。我要测定的是RNA表达量,首先得是取相同量的植物叶片,然后看下RNA量的多少,感觉这样才有意义啊!我先去仔细看看方法步骤吧,自己理解有误?
 
 
是这样的,每一步都最好保证同样量,取叶片时当然也是。不过就算完全一样的样品分成两份来提,得到的RNA的量也会有所差异的。