逆转录RNA大与50ng/ul会怎么样?

2016-11-28技术资料

逆转录的时候体系要求RNA的最大量是 50ng/ul ,大于这个数会有什么样的后果???

在做逆转录的时候体系要求RNA的最大量是 50ng/ul ,但是加入的量却远远大于这个数。我想知道,如果是大于这个量是不是体系就不能逆转了?还是超过这个最大限量,它也只是按50ng/ul进行逆转录?????
 
超过这个量,首先是反转录酶的能力有限,不能全部RNA都反转录,如果用来做定量,结果会不准确(不能保证你需要的特定RNA全部被反转录了)。其次,如果加入的体积过大,提取RNA时残留的一些试剂可能会影响酶活力。
不知道你的cDNA打算拿来做什么,如果是做PCR,那实在没必要加过量的RNA啊。
 

不晓得你要来干什么。我一般为了省试剂都把这个体系减半了。

 
我是用来做实时荧光定量PCR(QRT-PCR)的。还有想请教高手,我的PCR结果与Western Bolting结果相反。您遇到过这样的问题吗?谢谢!

不晓得你要来干什么。我一般为了省试剂都把这个体系减半了。
稀释的时候算错了。使得加入的剂量远远大于实际剂量。我之前也是用给定的体系逆转录。得到的cDNA我一般会稀释10倍之后再用。想请问一下,我稀释10倍之后会引起结果逆转吗!??

我没遇到这个问题,因为我没做过
不过培训qPCR时,公司的人有说过,有时候会有这种情况,不过具体的我记不得了,不好意思啦。
 
逆转录的过程
逆转录过程