GFP融合基因都是融合的整个基因么?还是其中的一段?

2016-11-17技术资料

关于GFP融合的蛋白的一些问题,想把GFP基因融合的已有蛋白的后面,问一下比较弱的几个问题:
1、GFP融合基因都是融合的整个基因么?还是其中的一段呢?
2、是不是不能破坏GFP基因的起始ATG啊?
3、需要注意那些方面的问题恩?
 

融合蛋白的意思是一起转录一起翻译,然后两个蛋白是黏在一起不是分开的
你的目的蛋白翻译出来就会在C或N端带了GFP,看你的质粒怎么设计的
一般ATG质粒上面有了(不然就自己设计)
而且多克隆位点都不会在GFP内部所以不会破坏GFP的起始密码子
就按照普通的表达蛋白的克隆做就行了
 
 
意思就是:我直接在要表达蛋白的C端按照不移码原则连接上GFP就可以了,是这样吧!!!多谢了!!
 
你的质粒不带GFP的吗?如果自己连,注意不要把poly A信号加在两个之间了,否则就杯具
 
有现成的GFP载体,直接连到clone位点就ok了,如果重新构建,一般注意是连到基因的N terminal和C terminal会有不同的效果,所以,一定要有control作对照,还有不要破坏GFP的起始密码子
 
对,是自己连。。
 
对照应该怎么设计呢?就是连在两端看有分别有什么影响么?

有啊,有些蛋白很奇怪的,融合了东西就没功能了……有的只能融合在C有的只能在N……
所以你应该设计,空质粒、插入目的片段的质粒、融合在C、融合在N、只有GFP的组。
 
阿拉伯芥的ACR11-,ACR12-GFP融合
 
阿拉伯芥的ACR11-,ACR12-GFP融合