最近电泳跑出的条带老是这个样子,究竟是怎么回事呢

2016-08-17技术资料

最近电泳出来的条带总是这个样子,用的是1%的琼脂糖凝胶,电泳液为1倍的TBE,电压120V,电流90mA,以前也是这样的条件,结果都挺好的,现在不知道是怎么回事,大家帮忙看看吧,谢谢啦!

 

是不是胶泥的时间不够就拔梳子了?

跑的是什么样品啊?多大?
最好点个marker嘛

 
胶凝的很好了,应该不是这个问题吧

 
这是个actin,178bp,maker跑出来也是这样的。
 

可能是梳子比较厚 孔比较大 在加上PCR效果好 点样量多了 就成矩形状 你试试比较薄的梳子 少点点样品试试

 

不是用TAE吗?

 

178bp的你起码配个2%的胶来跑啦(2.5-3%胶都有人跑),点100bp或50bp的marker。
1%的胶适宜跑1-10kb的片段。

 

换琼脂糖了?要不就是缓冲液有问题,建议重新配一下缓冲液

 

上样量过大

 

上样量有点大,其他没啥问题吧。建议楼主把maker的图以及以前正常时的图也传上来看看哦。


可能是梳子比较厚 孔比较大 在加上PCR效果好 点样量多了 就成矩形状 你试试比较薄的梳子 少点点样品试试
好,O(∩_∩)O谢谢

不是用TAE吗?
我用的是TBE啦

178bp的你起码配个2%的胶来跑啦(2.5-3%胶都有人跑),点100bp或50bp的marker。
1%的胶适宜跑1-10kb的片段。
我试试看,O(∩_∩)O谢谢

换琼脂糖了?要不就是缓冲液有问题,建议重新配一下缓冲液
缓冲液都换过一遍了,还是这个样子
yzm869475747

这个染色的是啥呢

你这是吧样品  跑的都挤到一起了?

178bp的你起码配个2%的胶来跑啦(2.5-3%胶都有人跑),点100bp或50bp的marker。
1%的胶适宜跑1-10kb的片段。
想问下 是不是目的片段越小 用的胶浓度越大 我不太明白这个是为什么
 

难道溴酚蓝加少了或没混匀

片段越小需要用的胶浓度越大。因为胶浓度越大,形成的孔径就越小,这样才能将各种不同小片段的DNA分离开来,并达到一定的精确度。分子生物学实验手册有对应的表格。
 
不知道楼主的问题解决了没?如果解决了请和大家分享下原因哟,谢谢!
 

缓冲液换一下吧,估计用久了,离子浓度太高了


178bp的你起码配个2%的胶来跑啦(2.5-3%胶都有人跑),点100bp或50bp的marker。
1%的胶适宜跑1-10kb的片段。
试了一下,稍微好一点了,谢谢!

不知道楼主的问题解决了没?如果解决了请和大家分享下原因哟,谢谢!
好了,我换了3%的胶,电压降低到70V,缓冲液也统统重新配置跑出来就正常了
 

降低上样量,提高凝胶浓度

 

话说为什么是绿色的带啊?