粗提DNA,为什么一部分菌株离心不下去?

2016-10-21技术资料

最近在做BT菌基因的筛选,利用水煮的办法粗提DNA,但是发现水煮后一部分菌株离心不下去,特请教一下原因?

粗提DNA,为什么一部分菌株离心不下去?
 
为什么煮沸?
 
以前提过,70-80度之间的,现在都忘记了
 
你说的菌株长得什么样子?什么颜色?你的转速多高?个人认为你的离心力不够大,煮沸后的变性蛋白没有被离下去。
 

哦,我没说清楚,这个办法适用于提取质粒DNA,煮沸可以破解细胞壁,并使蛋白和核DNA变性,而质粒DNA因为其互相缠绕的拓扑结构而不会变性。

为什么要煮沸?SDS裂解法不是很好吗?对目标细菌进行绿色荧光蛋白标记的实验过程

小弟最近在做BT菌基因的筛选,利用水煮的办法粗提DNA,但是发现水煮后一部分菌株离心不下去,特请教一下原因?
我不知道你这个问题是不是偶然的,我之前用冻融法破碎细胞就遇到了这种问题,我先冷冻然后用沸水加热破碎细胞,结果在离心的时候,离心管中的菌体就分为上下两层,在离心管中的液面上方也有一层菌体没有被离心到离心管的底部。
 

如果对后续的实验没有影响就没事了撒 但是如果影响很大的话 就建议还是用试剂盒 或者配置溶剂进行提取