总结显微镜活体成像实验

总结显微镜活体成像实验
1、操作方法
假如实验动物是哺乳动物，检测前Zui好褪毛处理，毛发对光的吸收很强
轻度麻醉，防止动物活动或代谢过快
检测时间短，重复性好
2、成像仪方面
激发光源有 全波长激发和激光激发两种：全波长可以一次性成像，但信号较弱，干扰也比较大；激光信号强，背景可以特征性去除，但成像较慢，多信号成像，成本偏高。
探头一般是CCD 但是冷却温度不同--一般说来，温度越低，背景信号少，可以探测若信号。也有CMOS探头，成像效果更好，但专业CMOS价格高昂。
3、假如是转基因方式标记目标，信号标记一般是 GFP RFP HRP，直接用荧光染料标记的QDot较多
GFP 转染技术相对成熟，GFP基因也容易获取；缺点是发出的绿光波长较短 穿透力差 特别是脊椎动物的红色素影响（肌红蛋白 血红蛋白） 成像往往很模糊，只能浅表成像
RFP 相对GFP优势明显，波长厂，穿透力强，操作也不繁琐，可以深度成像；但是，体外光源透射动物体，得到的往往是红光，也就是说，信号和背景往往混合，让结果不明显
前两种都是荧光蛋白（绿色、红色）优势是成像处理简单；缺点是成像时间不长（特别是GFP）信号随曝光时间衰减，激发光越强 衰减越快。
HRP 不但波长适中，而且成像时间长，没有信号衰减的烦恼；缺点是操作复杂，其显像底物对动物有一定的毒性（注射底物后才能发光）
荧光染料直接标记，传统的 Rhodamine、FITC 等使用很少，因为其效果与荧光蛋白差别不大，同样有衰减（据称 Alexa Fluor系列 衰减很少）
Qdot 成像操作与荧光蛋白相同，波长范围广，无衰减，可以多色标记，无毒性；缺点是无机染料，不能伴随实验动物一生，标记操作也复杂。
体内成像 两个关键因素：信号源、探测器（活体成像仪，包括探头和激发光）
总结：荧光信号发射波长越大，成像仪越灵敏，操作手法越成熟，可以探测到的组织器官越深。