菌种复壮,诱变但结果还是不尽人意怎么办?
本人做得是细菌转化实验,年前上罐的单位都在20000以上,年后用同样的斜面活化后再上罐单位始终在15000左右徘徊,我们拿原来的菌株做过了复壮,诱变但结果还是不尽人意,甘油管,斜面,种子还有发酵都是重复的年前实验也是不行。往各位高手们多指教。
是呀。操作条件和培养环境都是原来的,就因为是这样所以才着急呢,只是极各别原料不是原来的(厂家相同,不是同一批次)。但做这个也不可能每次的原料都是一模一样的呀,虽然是一个厂家但批次不一样东西多少应该也会有些差别。
第一,检验你的原料,原料的变化,特别是一些长效碳蛋源。
第二,菌种的检验,看看生长状况有变化没,pH,生物量。
第三,有保藏的菌种。重新挑取
祝你早日找到原因。这个问题比较难,要有耐心。
有没什么筛子重新挑选种子啊!
我也很郁闷啊,我的菌种是产酸的酵母,重复以前的条件,产量降了一半,很难找到原因,纠结中。。。。
会不会是培养环境的问题呢?试试看吧。
楼主,是不是菌株不稳定?出现了遗传退化
会不会是这生产菌的部分遗传标记丢失造成产量下降
重新纯化下还是建议在做两批发酵看看结果,如果真的是菌种遗传标记丢失就只有在打安培管取新菌了。。祝LZ好运。。
原因之一:有可能菌种退化或传代次数太多发生变异不稳定了,可以选择合适的培养基再从中重新分离、筛选目的代谢产物高的优良菌种。
可能是菌种不稳定或者退化了
这个问题是经常遇到的,哪怕一个小细节都可能造成影响,比如灭菌操作,罐子清洗等。
Zui难搞的就是菌种退化。
请楼主耐心,冷静下来。细细想想以前是怎么样做的,尽量重复来做。Zui好能请教一下做相同方面有经验的人。
祝你好运!早日解决问题,这是一个很好的学习的机会。
这个情况无论在实验室还是生产单位都是很常见的,复壮是Zui基本的措施。我们也遇到过这个问题,比较麻烦。经过分离单菌落,一个一个筛选,Zui后筛选到了高产菌株。如果经过大量的筛选还是没有找到的话,就只好从原有基础上进行再次诱变了。
有没有保存安瓿瓶?用那里的原菌种试试。
既然大家都说完了 我没什么了
Zui可能原因:碳氮源的问题,看看不同批次之间是不是有差别,比如执行的标准,各有效组分含量什么的。
其他原因:
1、菌种:上罐前先检查菌种在平板、三角瓶中的生长状态是否与以前有异。如不相同,请从原始菌种管中重新划线分离,选取生长性能好的单菌落。
2、检查发酵罐各个控制电极是否准确,重新标定。
做这样的产品,Zui可怕的是没有原始数据的积累,包括一些基础的生长曲线,要有生长曲线的累积和积累,问题也不难发现了,菌种的问题好像不是大问题,冻干管重复不出来发酵量,这个不是菌种问题,传代也没有超过想象的代数,这种对比只有同比的摇瓶表达对比,要是摇瓶表达和以前没有差异,问题出在大罐条件上,摇瓶出问题了,调整培养基恢复摇瓶水平。关于稳定的工程菌,在任何时候都要持续筛选,没有停留。要是摇瓶表达没有出问题的话,要从基础的生长曲线开始排查原因了,生长曲线恢复正常后,在从可以示踪的代谢或者营养物消耗跟踪大罐表达的问题,不同季节,不同设备,同一个品种出现这样的问题都是正常的,一个稳定的发酵产品和工艺,必须经过不同设备,不同季节的考验才算稳定的,楼主努力吧,做发酵更要细心和积累,都是累死人不偿命的工作丫,祝福大家
楼主这个问题应该不算严重.我在发酵过程中,曾经出现过每批产量在逐步下降,在查找问题过程里,产量一直下降.后面从四方面来查找原因:1 菌种 2 原料 3 设备 4 操作 .Zui后发现有一种原料每个批号的质量都不一样,都在合格范围里,但对发酵影响巨大.从此规定该原料购买和使用前必须进行小罐实验,以确保生产顺利.