菌种复壮,诱变但结果还是不尽人意怎么办?

2016-10-28技术资料

本人做得是细菌转化实验,年前上罐的单位都在20000以上,年后用同样的斜面活化后再上罐单位始终在15000左右徘徊,我们拿原来的菌株做过了复壮,诱变但结果还是不尽人意,甘油管,斜面,种子还有发酵都是重复的年前实验也是不行。往各位高手们多指教。

是不是什么操作条件和药品变化了?一下子少了1/4,差别很显著。
 

是呀。操作条件和培养环境都是原来的,就因为是这样所以才着急呢,只是极各别原料不是原来的(厂家相同,不是同一批次)。但做这个也不可能每次的原料都是一模一样的呀,虽然是一个厂家但批次不一样东西多少应该也会有些差别。

菌种复壮,诱变但结果还是不尽人意怎么办?

 
会不会是这生产菌的部分遗传标记丢失造成产量下降
 

第一,检验你的原料,原料的变化,特别是一些长效碳蛋源。
第二,菌种的检验,看看生长状况有变化没,pH,生物量。
第三,有保藏的菌种。重新挑取
祝你早日找到原因。这个问题比较难,要有耐心。

楼主,是不是菌株不稳定?出现了遗传退化
 

有没什么筛子重新挑选种子啊!
我也很郁闷啊,我的菌种是产酸的酵母,重复以前的条件,产量降了一半,很难找到原因,纠结中。。。。

原因之一:有可能菌种退化或传代次数太多发生变异不稳定了,可以选择合适的培养基再从中重新分离、筛选目的代谢产物高的优良菌种。
 

会不会是培养环境的问题呢?试试看吧。

可能菌种性状不太稳定,在筛一下吧,祝你好运!

楼主,是不是菌株不稳定?出现了遗传退化
我想应该是,之前这个菌株是不太稳定

 
同命相连吧,让 我们共同努力吧:)

会不会是这生产菌的部分遗传标记丢失造成产量下降
我想可能是吧,要不怎么会下降这么多呢
 

重新纯化下还是建议在做两批发酵看看结果,如果真的是菌种遗传标记丢失就只有在打安培管取新菌了。。祝LZ好运。。


原因之一:有可能菌种退化或传代次数太多发生变异不稳定了,可以选择合适的培养基再从中重新分离、筛选目的代谢产物高的优良菌种。
一共传了两代,可能是菌种退化的原因吧。
 

可能是菌种不稳定或者退化了

发酵的控制条件不变的情况下,原材料的影响还是比较大的,同一厂家不同批次的原料有时影响也是很大的,我也是做发酵的,每批来的主要原材料——尤其是有机氮源都要先进行小试,找出Zui佳的配比后再到生产上使用。不知道你的氮源中是否有玉米浆或玉米浆干粉,不同批次变化很大,对生产的影响也很大,如果是的话可以从玉米浆或玉米浆干粉查找原因。粗浅的建议,仅供参考。
 
对比以前不一样的地方,一个一个排查。
这个问题是经常遇到的,哪怕一个小细节都可能造成影响,比如灭菌操作,罐子清洗等。
Zui难搞的就是菌种退化。
请楼主耐心,冷静下来。细细想想以前是怎么样做的,尽量重复来做。Zui好能请教一下做相同方面有经验的人。
祝你好运!早日解决问题,这是一个很好的学习的机会。
 
有没有保存安瓿瓶?用那里的原菌种试试。
 
是不是放的时间太长了,长期处于生长抑制。产生了可遗传的自身的代谢抑制现象
 

这个情况无论在实验室还是生产单位都是很常见的,复壮是Zui基本的措施。我们也遇到过这个问题,比较麻烦。经过分离单菌落,一个一个筛选,Zui后筛选到了高产菌株。如果经过大量的筛选还是没有找到的话,就只好从原有基础上进行再次诱变了。


有没有保存安瓿瓶?用那里的原菌种试试。
有保存,上罐单位下降4000左右

既然大家都说完了 我没什么了
呵呵,谢谢参与,望以后多多交流。
 

Zui可能原因:碳氮源的问题,看看不同批次之间是不是有差别,比如执行的标准,各有效组分含量什么的。
其他原因:

1、菌种:上罐前先检查菌种在平板、三角瓶中的生长状态是否与以前有异。如不相同,请从原始菌种管中重新划线分离,选取生长性能好的单菌落。
2、检查发酵罐各个控制电极是否准确,重新标定。

问题不知道解决了没?看了很长时间,体验楼主的焦急,往往这些问题问得太笼统,不好回答,做什么品种也不知道,也不知道是上实验小罐还是生产大罐。
做这样的产品,Zui可怕的是没有原始数据的积累,包括一些基础的生长曲线,要有生长曲线的累积和积累,问题也不难发现了,菌种的问题好像不是大问题,冻干管重复不出来发酵量,这个不是菌种问题,传代也没有超过想象的代数,这种对比只有同比的摇瓶表达对比,要是摇瓶表达和以前没有差异,问题出在大罐条件上,摇瓶出问题了,调整培养基恢复摇瓶水平。关于稳定的工程菌,在任何时候都要持续筛选,没有停留。要是摇瓶表达没有出问题的话,要从基础的生长曲线开始排查原因了,生长曲线恢复正常后,在从可以示踪的代谢或者营养物消耗跟踪大罐表达的问题,不同季节,不同设备,同一个品种出现这样的问题都是正常的,一个稳定的发酵产品和工艺,必须经过不同设备,不同季节的考验才算稳定的,楼主努力吧,做发酵更要细心和积累,都是累死人不偿命的工作丫,祝福大家
 

楼主这个问题应该不算严重.我在发酵过程中,曾经出现过每批产量在逐步下降,在查找问题过程里,产量一直下降.后面从四方面来查找原因:1  菌种 2  原料  3  设备   4   操作   .Zui后发现有一种原料每个批号的质量都不一样,都在合格范围里,但对发酵影响巨大.从此规定该原料购买和使用前必须进行小罐实验,以确保生产顺利.